UM PROMOTOR SINTÉTICO PARA ALTA EXPRESSÃO DE GENES HETERÓLOGOSEME scherichia coli EM PERFORMANCE BEM REGULADA

A presente invenção refere-se à engenharia do novo promotor sintético DM, funcional no organismo modelo Escherichia coli, com performance de forte expressão e alto nível de regulação, construído com inspiração no sistema do promotor lac. Visando aprimorar sua regulação para aplicações industriais, o design foi realizado a partir da sobreposição da sequência operadora laço à região -35 de reconhecimento da subunidade s70, precisamente impedindo o início da transcrição pela RNA polímerase holoenzima. Esta estratégia possibilitou alto nível de expressão e regulação gênica, demonstrada pela análise quantitativa da síntese da Green Fluorescent Protein (GFP) e da proteína híbrida datiorredoxina humana fusionada ao domínio catalítico da enteroquinase bovina sob controle do promotor sintético DM, nos vetores pDM-GFP e pDM-TEK. O presente promotor, clonado no versátil vetor de expressão pDM02, apresenta vasta aplicação biotecnológica, expandindo as ferramentas para construção de inovadores circuitos genéticos. Principalmente, a presente invenção abre caminho para expressão de genes de proteínas recombinantes de interesse industrial, inclusive as tóxicas, cuja elevada produção e minuciosa regulação tem sido um desafio.